خدمات پژوهشی جنین شناسی با روش های نوین مانند IVF

خدمات ارائه شده جنین شناسی در شرکت هیستوژنوتک

جداسازی و شستشوی اسپرم
اسپرموگرام با روش دستی و CASA
رنگ آمیزی تخصصی کروماتین اسپرم
ارائه محیط کشت های شستشو و گرادیان شیب غلظت اسپرم
محیط دست ورزی اسپرم، تخمک و جنین
تحریک تخمک گذاری و جداسازی فولیکول تخمدانی
آماده سازی تخمک و انجام لقاح آزمایشی (IVF)
تزریق داخل سیتوپلاسمی(ICSI)
بررسی آپوپتوز در اسپرم، تخمک و جنین
بررسی استرس اکسیداتیو در تخمدان، بیضه، اسپرم، تخمک و جنین
بررسی میزان غلظت آنتی اکسیدان های داخل بافت و سلول
انتقال جنین به رحم در مدل حاملگی کاذب
فریز جنین، اسپرم و تخمک
ارائه محیط فریز و ذوب جنین و تخمک
آموزش تکنیک تزریق داخل سیتوپلاسمی (ICSI) در سطح بالینی

جنین شناسی و علم تولید مثل، با رشدی پرشتاب و چشم‌گیر، یکی از پربارترین علوم پزشکی در سه دهه اخیر به حساب می آید. تهیه و آماده سازی گامت، فراهم کردن امکان کشت، تشکیل موفق جنین در آزمایشگاه، نگهداری طولانی مدت یا انتقال صحیح آن به رحم در زمان مناسب، نمونه‌هایی از حساس‌ترین و ضروری‌ترین فعالیت‌ها در حوزه درمان ناباروری است که همگی بر یافته‌ها و دستاوردهای علم جنین شناسی استوار است.

به این ترتیب آزمایشگاه تحقیقاتی بافت و ژن هیستوژنوتک، آمادگی اراِئه خدمات زیر را به محققین و پژوهشگران این عرصه دارد.

خدمات پژوهشی جنین شناسی با روش های نوین مانند IVF

خدمات ارائه شده جنین شناسی در شرکت هیستوژنوتک

جداسازی و شستشوی اسپرم
اسپرموگرام با روش دستی و CASA
رنگ آمیزی تخصصی کروماتین اسپرم
ارائه محیط کشت های شستشو و گرادیان شیب غلظت اسپرم
محیط دست ورزی اسپرم، تخمک و جنین
تحریک تخمک گذاری و جداسازی فولیکول تخمدانی
آماده سازی تخمک و انجام لقاح آزمایشی (IVF)
تزریق داخل سیتوپلاسمی(ICSI)
بررسی آپوپتوز در اسپرم، تخمک و جنین
بررسی استرس اکسیداتیو در تخمدان، بیضه، اسپرم، تخمک و جنین
بررسی میزان غلظت آنتی اکسیدان های داخل بافت و سلول
انتقال جنین به رحم در مدل حاملگی کاذب
فریز جنین، اسپرم و تخمک
ارائه محیط فریز و ذوب جنین و تخمک
آموزش تکنیک تزریق داخل سیتوپلاسمی (ICSI) در سطح بالینی

خدمات مطالعات جنین شناسی

جداسازی و شستشوی اسپرم

گرادیان شیب غلظت اسپرم

اسپرموگرام با روش دستی و CASA

رنگ آمیزی تخصصی کروماتین اسپرم

محیط دست ورزی اسپرم، تخمک و جنین

آماده سازی تخمک و انجام IVF

تحریک تخمک گذاری و جداسازی فولیکول

جداسازی و شستشوی اسپرم

گرادیان شیب غلظت اسپرم

اسپرموگرام با روش دستی و CASA

رنگ آمیزی تخصصی کروماتین اسپرم

محیط دست ورزی اسپرم، تخمک و جنین

آماده سازی تخمک و انجام IVF

تحریک تخمک گذاری و جداسازی فولیکول

فریز جنین، اسپرم و تخمک

انجام فرآیند فریز (Freezing) یا امبریو کرایوپرزرویشن (Embryo cryopreservation) جهت نگهداری بلند مدت جنین در نیتروژن مایع در مراحل مختلف تکوینی از ۲ هسته تا بلاستوسیست، امری متداول در آزمایشگاه کمک باروری است. فریز تخمک برای حفظ کیفیت جنین، نیازمند محیط کشت‌های مغذی با اسمولاریته و PH مناسب رشد جنین می‌باشد. به علاوه به منظور دستیابی به جنین‌های باکیفیت، استفاده از تخمک و اسپرم فریز شده در آزمایشگاه می‌تواند در هماهنگی سیکل‌های تخمدانی و آماده بودن رحم برای انتقال جنین موثر واقع شود. با تکیه بر دانش متخصصین با تجربه در آزمایشگاه آندرولوژی و جنین شناسی بافت و ژن پاسارگاد با داشتن تجهیزات آزمایشگاه ART و محیط کشت‌های تخصصی برای فریز و ذوب جنین، تخمک و اسپرم، نتایج بالائی از بقا در طی فرآیند دفریز مشاهده شده است که این نتایج توانسته در لقاح آزمایشگاهی موفق در موش مدل‌سازی شده اثرات چشمگیری داشته باشد.

تزریق داخل سیتوپلاسمی (ICSI)

گاهی اوقات اسپرم به دلایل مختلف نمی‌تواند به لایه بیرونی تخمک نفوذ کند. لایه بیرونی تخمک ممکن است ضخیم باشد یا گیرنده‌های سطحی دچار اختلال بوده و یا اسپرم قادر به شنا نباشد. در این موارد، روشی به نام تزریق اسپرم داخل سیتوپلاسمی (ICSI) همراه با لقاح آزمایشگاهی (IVF) برای کمک به بارور شدن تخمک انجام می‌شود. در طی ICSI، یک اسپرم به طور مستقیم به سیتوپلاسم تخمک تزریق می‌شود. دو روش برای بارور شدن تخمک در آزمایشگاه وجود دارد. روش مرسوم یا سنتی و ICSI. در IVF سنتی، ۵۰۰۰۰ یا بیشتر اسپرم شناور در کنار تخمک در یک ظرف آزمایشگاهی قرار می‌گیرد. لقاح زمانی اتفاق می‌افتد که یکی از اسپرم‌ها وارد سیتوپلاسم تخمک شود. در فرآیند ICSI از یک سوزن کوچک به نام میکروپیپت برای تزریق یک اسپرم به مرکز تخمک استفاده می‌شود. با IVF سنتی یا ICSI، زمانی که لقاح اتفاق می‌افتد، تخمک بارور شده (که اکنون جنین نامیده می‌شود) به مدت ۱ تا ۵ روز قبل از انتقال به رحم زن در آزمایشگاه رشد می‌کند.

بررسی آپوپتوز در اسپرم، تخمک و جنین

به منظور دستیابی به جنین با کیفیت نیاز به اسپرم و تخمک با مورفولوژی طبیعی، سیتوپلاسم یکنواخت و DNA سالم می‌باشد. عوامل محیطی مختلف شامل استرس‌های محیطی در آزمایشگاه‌های کمک باروری، فرآیند‌های کشت و نگهداری سلول در آزمایشگاه، فرآیند فریز و ذوب و عوامل درون تنی شامل اختلالات ژنتیکی در هر دو جنس مرد و زن می‌تواند منجر به ایجاد جنین و یا گامت‌های معیوب با DNA آسیب دیده و یا آپوپتوز شده شود. تست‌های آزمایشگاهی متنوعی در هیستوژنوتک جهت ارزیابی آپوپتوز در سلول‌های زایا و یا جنین بارور شده وجود دارد که می‌تواند در تشخیص این مشکل و یا طراحی مطالعات تحقیقاتی موثر باشد. این تست‌ها شامل تست تانل، تست انکسین و تست هالواسپرم می‌باشد.

بررسی میزان استرس اکسیداتیو در بافت تخمدان، بیضه، اسپرم، تخمک و جنین

اندازه گیری استرس اکسیداتیو و انواع اکسیدان‌های و گونه‌های اکسایشگر اکسیژنی (ROS) در بافت‌های تخمدان و بیضه و در سلول‌های زایای نر و ماده از پایه‌ای‌ترین تست‌های مطالعات تحقیقاتی بوده و اطلاع از مقدار این ترکیبات نقش اساسی در اختلالات ناباروری دارد. وجود جنین‌های بی‌کیفیت در آزمایشگاه‌های بالینی می‌تواند به دلیل به هم خوردن تعادل بین ترکیبات آنتی اکسیدانی و اکسیدانی باشد که با تست‌های الایزا و فلوسیتومتری در آزمایشگاه‌های هیستوژنوتک قابل اندازه گیری هستند.

بررسی میزان غلظت آنتی اکسیدان های داخل بافت و سلول

بررسی متغیرهای آنتی اکسیدانی نظیر کاتالاز (CAT)، سوپراکسیددیسموتاز (SOD)، GPX، GSH، TAC و متغیر استرس اکسیداتیو شامل ROS و MDA بر بافت و سلول‌های زایا و جنین های حاصله در انواع تحقیقات بررسی شده‌اند. در واقع اندازه‌گیری این شاخص‌های اکسایشی و آنتی‌اکسیدان‌ها علاوه بر ایجاد مسیرهای پژوهشی در مطالعه انواع افزودنی‌ها یا مکمل‌های گیاهی و شیمیائی به محیط کشت جنین و سلول‌های زایا، می‌تواند در فرآیندهای درمانی در بیماری‌های مرتبط با بافت تخمدان و بیضه نظیر PCO و آزواسپرمی مدنظر قرار گیرد.

انتقال جنین به رحم در مدل حاملگی کاذب

به منظور انتقال جنین (Embryo transfer) به داخل بافت رحم در مدل حیوانی نیاز به ایجاد شرایط کاذب حاملگی است (Pseudo pregnancy). حاملگی کاذب که از نظر بالینی Pseudo pregnancy نامیده می‌شود، بر این باور است که شما در حال انتظار بچه‌دار شدن هستید در حالی که واقعاً بچه‌ای را حمل نمی‌کنید. افراد مبتلا به حاملگی کاذب، علائم بارداری را دارند ولی جنینی در رحم ندارند. بر این اساس هورمون های جنسی بالا بوده و دیواره رحم آماده پذیرش جنین می‌باشد ولی جنین وجود ندارد. این حالت در راستای القای حاملگی در حیوانات با روش استفاده از چرخش سواپ در واژن حیوان ماده و یا قرارگیری حیوان ماده در مجاورت حیوان نر وازکتومی شده ایجاد می‌شود. با ایجاد این حالت، جنین های IVF شده آماده انتقال به بدن حیوان ماده می‌شوند.

شاید جواب سوال خود را بیابید

سوال های متداول مشتریان

نگهداری جنین، تخمک و یا اسپرم در شرایط فریز تا چه مدتی امکان پذیر است؟

به منظور نگهداری جنین، تخمک و یا اسپرم در مدت کوتاه در شرایط فریز، بهترین راه نگهداری در دمای ۸۰- درجه سانتی گراد می باشد ولی در صورت نیاز به نگهداری طولانی تر، استفاده از ازت مایع ۱۹۶- درجه سانتی گراد می تواند منجر به حفظ ساختار ژنومی و مورفولوژی سلول ها در بهترین شرایط نزدیک به حالت Fresh گردد. به این ترتیب مطابق مطالعات گسترده، این روش نگهداری تا سالیان متمادی می تواند با حفظ شرایط نگهداری استاندارد برای این منظور استفاده گردد. این نگهداری طولانی مدت که گاهی تا ۱۰ سال هم بوده، توانسته است منجر به تولد جنین های سالم بدون هیچ نقصی گردد.

آیا امکان انجام تست های مولکولی بر روی تخمک، جنین و اسپرم وجود دارد؟

انجام تست های مولکولی شامل بررسی بیان ژن (Real Time PCR) و پروتئین (ICC, Western Blot) و یا بررسی عملکرد برخی از آنزیم ها (الایزا)، می تواند بر روی اسپرم تازه و فریز-ذوب شده، تخمک تازه و فریز-ذوب شده با حداقل تعداد ۱ عدد، جنین تازه و فریز-ذوب شده با حداقل تعداد ۱ برای برخی از تست ها انجام شود. برای این منظور در تعدادهای کم نیاز به کیت های تخصصی تر بود و در تعداد بیشتر با روش دستی برخی از تست ها قابل مطالعه می باشند.

روش تشخیص تخمک ها در فازهای مختلف بلوغ چیست؟

تخمک یا اووگونی به عنوان سلول زایای ماده، دارای مراحل بلوغ هسته ای متفاوتی بوده که با محصور بودن در داخل فولیکول و حمایت شدن با سلول های فولیکولار، مراحل تکامل خود را با تحریکات هورمون ها (FSH,LH, Estrogen, Progesterone) در طی سیکل جنسی طی می کند. براساس اندازه فولیکول ها و تعداد ردیف سلول های فولیکولی اطراف تخمک، فولیکول ها به نوع بدوی (پریموردال : Primordial)، اولیه (Primary)، ثانویه (Secondary)، پره آنترال (Pre-Antral)، آنترال (Graf) تقسیم می شوند. از طرفی تخمک های موجود در داخل فولیکول ها براساس مرحله بلوغ هسته ای خود به انواع GV، GVBD، MI، MII تقسیم می شوند که در واکنش به فازهای مختلف سیکل جنسی در هر لحظه، بخشی از تخمک ها می توانند در هر یک از مراحل بلوغ هسته خود قرار داشته باشند.</p>

روش بررسی تست های آنتی اکسیدانی در بافت تخمدان، بیضه و سلول های زایا چیست؟

انجام تست های آنتی اکسیدانی یا استرس اکسیداتیو در تخمک و جنین با اسپرم و بافت تخمدان و تستیس تفاوتی هایی دارد که به دلیل تعداد کم سلول جنین و تخمک می باشد. برای انجام تست های آنتی اکسیدانی گلوتاتیون پراکسیداز (GPX)، استرس اکسیداتیو (ROS)، بررسی فعالیت میتوکندریائی با رنگ JC لازم است میزان فعالیت آنزیم یا سایر متغییرهای ذکر شده با تصاویر فلورسانت با نرم افزار Image J به حالت کمی تبدیل شود و با تصوبرداری فلورسانت ارزیابی از تخمک و جنین انجام گیرد. در صورتی که در اسپرم، تخمدان و بیضه با روش الایزا یا فلوسیتومتری یا اسپکتروفلوریمتری این ارزیابی ها انجام می گیرد. سایر تست ها نظیر SOD یا سوپراکسیددیسموتاز، ظرفیت انتی اکسیدانی کل یا TAC در هر دو دسته سلول و بافت با روش الایزا قابل انجام می باشد.

آیا در آزمایشگاه می توان حیوان دستکاری ژنتیکی شده یا ترانسژنیک ایجاد کرد؟

به منظور ایجاد حیوانات ترانسژنیک، لازم است قطعه ژنی مورد نظر که مورد مطالعه می باشد با روش میکرواینجکشن (ICSI) به داخل پرونوکلئوس نر تزریق شود. از آنجائی که ژن گزارشگر GFP می تواند کنار ژن هدف بیان شود می تواند موفقیت عملکرد وکتور در جنین را نشان دهد. به این ترتیب پس از تکثیر سلول های جنینی، ژن هدف در تمام سلول های جنین بیان می شود. جنین حاصله از طریق ترانسفر جنین به لوله فالوپ یا مستقیما داخل رحم، به رشد خود ادامه داده تا یک موجود کامل ترانسژنیک ایجاد گردد.

آیا تکنیک کار با جنین در مدل های حیوانی مشابه نمونه های انسانی است؟

از آنجائی که بسیاری از مراحل کار با اسپرم، جنین و تخمک تقریبا مشابه است. لذا، انجام کلیه مراحل کار نظیر شستشوی اسپرم، فریز و ذوب اسپرم، بررسی پارامترهای اسپرمی، تزریق داخل سیتوپلاسمی اسپرم، جداسازی اسپرم متحرک و با کیفیت خوب از سایر اسپرم ها، مشابه با مورد انسانی بوده و می توان با فراگیری این بخش در آزمایشگاه آندرولوژی انسانی کار کرد. با این حال به دلیل حساسیت بالای کار با تخمک و جنین، پس از فراگیری کلیه مراحل کار با تخمک و جنین حیوان، لازم است دوره های کارورزی در آزمایشگاه انسانی شامل دوره ۶ ماهه و یک ساله طی و سپس با اطمینان با جنین و تخمک انسانی کار کرد.

برای انجام تست های مولکولی و الایزا با چند عدد تخمک یا جنین می توان کار کرد؟

با توجه به پیشرفت در تولید کیت های استخراج تخمک و جنین، کار با تک سلول به راحتی قابل انجام است، لذا جهت انجام تکنیک Real time PCR و بررسی بیان ژن می توان با تنها یک تخمک یا جنین به روش Single cell PCR بیان ژن های مربوط به جنین و تخمک را ارزیابی کرد. از طرفی به منظور انجام تست های الایزا و بررسی های استرس اکسیداتیو با داشتن حداقل ۵ سلول تخمک و جنین می توان این تست ها را انجام داد.

کشت تخمک یا جنین و قطره گذاری ظرف کشت جنین بر چه اساسی می باشد؟

در این خصوص ظرف کشت مورد استفاده از جنس پلی استایرن و با چسبندگی مناسب باید استفاده شود. به این ترتیب لازم است در محیط های دست ورزی از محیط کشت HEPES دار استفاده گردد تا شرایط بافری پایداری ایجاد شود. به علاوه به منظور حفظ دمای مناسب لازم است از Warm Plate استفاده شود تا در حین کار دمای ۳۷ درجه سانتی گراد حفظ گردد. قطرات محیط کشت با ابعاد ۵ تا ۱۰ میکرولیتر که تا میزان ۱۰۰ میکرولیتر نیز قابل افزایش است به صورت قراردادی با یک ریتم مشخص از ابتدای ورود تخمک به ظرف تا قطره اخر به صورت علامت گذاری شده استفاده می شود. روی قطرات آماده شده از مینرال اویل (Mineral Oil) استفاده می شود تا در زمان باز بودن درب ظرف کشت در فضای زیر میکروسکوپ از آلودگی جلوگیری شود.