تست اوانس بلو مغزی به طور گسترده در مطالعات حیوانی و آزمایشگاه های مطالعاتی بافت شناسی مورد استفاده قرار گرفته و از جمله کاربردهای آن می توان به تخمین حجم خون و نفوذپذیری عروق، تشخیص غدد لنفاوی و شناسایی محل تومور اشاره کرد. در سال های اخیر مجموعه‌ای از مشتقات اوانس بلو ساخته شده اند که دارای نیمه عمر بیشتر در خون هستند و دیرتر آزادسازی می شوند. علاوه بر این در برخی از مطالعات پیش بالینی حیوانی، ویژگی جدید نکروز محور از این رنگ گزارش شده است.
رنگ اوانس بلو (Evans Blue) نخستین بار توسط هربرت مک لین اوانس در سال ۱۹۱۴ معرفی شد. این رنگ سابقه ی طولانی به عنوان رنگ بیولوژیکی و عامل تشخیصی دارد. قدمت استفاده از این رنگ به اوایل قرن بیستم باز می‌گردد. در بین تمام رنگ های آبی، مانند Methylen Blue، Trypan Blue، Patent Blue ، اوانس بلو (Evans Blue) تنها رنگی است که سابقه طولانی به عنوان رنگ بیولوژیکی و عامل تشخیصی بالینی دارد. این رنگ به نام های T-1824 و Direct Blue 53 نیز نامیده می شود.
مطالب مرتبط: رنگ آمیزی های بافت شناسی – آماده سازی بافت در آزمایشگاه بافت شناسی
ویژگی های رنگ اوانس بلو
رنگ اوانس بلو، با وزن مولکولی ۹۶۱ دالتون و حلالیت بالا در آب (۲۸۰ گرم در لیتر)، به شدت به آلبومین سرم در داخل بدن و در شرایط آزمایشگاهی متصل می شود و در نتیجه، به یک ردیاب پروتئین با وزن مولکولی بالا (۶۹ کیلو دالتون) تبدیل می شود. هنگامی که به صورت داخل وریدی یا داخل صفاقی تزریق می شود، Evans Blue متصل به آلبومین، در خون ثابت می ماند و در کل بدن توزیع می شود. هنگامی که رنگ Evans Blue بیش از حد تزریق شود، می تواند به کل بافت ها و اندام های حیوان از جمله چشم، گوش، بینی و پنجه ها نفوذ کند و آنها را با رنگ آبی شدید رنگ آمیزی کند.
آموزش ویدئویی کامل آموزش تست اوانس بلو مغزی در موش آزمایشگاهی
رنگ Evans Blue با تابش نور سبز فلورسانس قرمز روشن ساتع می کند. بنابراین، این رنگ یک راه ساده و راحت برای شناسایی و بررسی های مورفولوژیکی و کمی سازی های ماکروسکوپی و میکروسکوپی را فراهم می کند. ویژگی فلورسنت رنگ Evans Blue در جنبه‌های مختلفی از جمله شناسایی غدد لنفاوی اطراف کبد، تأیید تزریق موفقیت آمیز به قلب جنین zebra fish و بررسی خارج شدن رنگ از رگ‌های خونی به داخل بافت استفاده می شود.
بررسی نفوذ پذیری عروق با استفاده از رنگ اوانس بلو
وجود سدها و موانع فیزیولوژیکی با نفوذپذیری انتخابی در بدن، برای رشد و عملکرد مناسب اندام ها ضروری است. سلول های اندوتلیال، مجرای عروق خونی را پوشانده و یک سد نیمه تراوا تشکیل می دهند که در انتقال انتخابی، بین خون و فضای بین بافتی همه ی اندام ها ضروری است. اختلال در این سد اندوتلیالی می تواند منجر به افزایش نفوذپذیری و نشت عروق شود. یکی از موارد استفاده از رنگ اوانس، بررسی و اندازه گیری نفوذ پذیری عروق در شرایط in vivo با استفاده از موش یا رت آزمایشگاهی است.
استفاده از اوانس بلو روشی کاملا اثبات شده برای آزمایش نفوذپذیری عروق در داخل بدن است و به نام تست مایلز نیز شناخته می شود. سنجش بر این اساس است که، تحت شرایط فیزیولوژیکی پایه، آلبومین از سد اندوتلیال عبور نمی کند. رنگ اوانس بلو به جریان خون حیوان آزمایشگاهی تزریق می شود. در شرایط فیزیولوژیکی نرمال انتظار می رود که رنگ Evans Blue در جریان خون محدود شود. هنگامی که یک محرک نفوذپذیری عروقی به صورت موضعی یا سیستمیک اضافه می‌شود، رگ‌های خونی شروع به نشت پروتئین می‌کنند و با توجه به میل ترکیبی بالای اوانس بلو به آلبومین، بافت هایی که دارای عروق نفوذپذیر هستند به سرعت به رنگ آبی در می آیند. تزریق موفقیت آمیز رنگ در ورید جانبی دم موش آزمایشگاهی برای گرفتن نتیجه مطلوب بسیار مهم است.
عوامل موثر در نفوذ رنگ اوانس بلو
نفوذپذیری رگ به سن و وزن حیوان بستگی دارد، بنابراین هنگام مقایسه گونه های مختلف موش ها و رت ها با یکدیگر، ضروری است که حیوانات مورد آزمایش سن و وزن یکسان داشته باشند. عوامل دیگری که بر نفوذپذیری سد اندوتلیال تأثیر می‌گذارند، شرایط نگهداری موش و رت مانند دما، رطوبت و از همه مهمتر، استرس موش آزمایشگاهی است. با توجه به عوامل متعددی که می تواند بر نتیجه آزمایش تأثیر بگذارد، همیشه توصیه می شود که آزمایش حداقل سه بار تکرار شود و تجزیه و تحلیل آماری انجام شود.
تست اوانس بلو مغزی موش یا رت
از این روش می توان برای مقایسه نفوذپذیری عروق موش و رت هایی که از نظر ژنتیکی اصلاح شده اند و همچنین موش و رت هایی با زمینه های ژنتیکی متفاوت استفاده کرد. این سنجش می تواند برای آزمایش اثر ترکیبات مختلف بر نفوذپذیری عروق مورد استفاده قرار بگیرد. اوانس بلو برای ارزیابی نفوذپذیری سد خونی مغزی به ماکرومولکول ها نیز کاربرد دارد. از آنجایی که آلبومین سرم نمی تواند از سد عبور کند و تقریباً تمام اوانس بلو به آلبومین متصل می شود، به طور معمول بافت عصبی بدون رنگ باقی می ماند. در مغز، نشت این رنگ به پارانشیم، نشانه ای از اختلال سد خونی مغزی (BBB) در نظر گرفته می شود.
مطالب مرتبط: انواع تزریقات در موش و رت و سایر حیوانات آزمایشگاهی – خونگیری از موش رت و سایر حیوانات آزمایشگاهی
نحوه تزریق اوانس بلو از طریق ورید دمی
محلول استریل ۰/۵ درصد اوانس بلو را در PBS تهیه کنید. در صورت لزوم، محلول را با فیلتر استریل کنید تا ذرات معلق حل نشده حذف شوند. ۲۰۰ میکرولیتر محلول Evans Blue را داخل یک سرنگ آسپیره کنید. مراقب باشید که حبابی در داخل سرنگ ایجاد نشود. موش های ۸ تا ۱۲ هفته ای را در وسیله ی مهار قرار دهید تا حیوان آزادانه حرکت نکند، اما بتوان دم آن را به دست گرفت. دم را بین انگشتان شست و اشاره گرفته، سوزن (گیج کوچک، ۲۷-۳۰) را با زاویه ۱۵-۱۰ درجه وارد دم حیوان کنید. برای تأیید جایگذاری مناسب، فشار معکوس وارد نکنید زیرا ممکن است ورید را جمع کند. ۲۰۰ میکرولیتر محلول Evans Blue را به آرامی در رگ دم موش آزمایشگاهی تزریق کنید. برای حصول اطمینان از تزریق درست، به حرکت پیستون سرنگ توجه کنید. موش را دوباره داخل قفس خود قرار داده و به مدت ۳۰ دقیقه آن را تحت نظر قرار دهید.
خدمات مرتبط: پژوهش و مطالعه بروی حیوانات آزمایشگاهی – پژوهش های فیزیولوژی ورزشی و علوم ورزشی – ایجاد انواع مدل های حیوانی
مطالب مرتبط: رنگ آمیزی های بافت شناسی – انواع تزریقات در موش و رت و سایر حیوانات آزمایشگاهی
