تکنیک کلنی کانت (Colony counting) برای کشت باکتری و قارچ از یک محیط مایع بر روی پلیت کشت در آزمایشگاه میکروبیولوژی استفاده می شود که هم روش به نسبت آسانی است و هم شمارش باکتری ها از این روش میسر می شود.
روش ها زیادی تا به امروز برای جداسازی میکروارگانیسم ها شرح داده شده است که برای جداسازی باکتری ها و قارچ های متفاوت از نمونه های بالینی و یا محیط های متفاوت استفاده می شود. روش پخش کردن در سطح پلیت یکی از رایج ترین روش های کشت باکتری در آزمایشگاه میکروبیولوژی می باشد.
زمانی می توان روش کشت پخش کردن را موفق دانست که کلنی های باکتریایی و قارچی قابل شمارش و متمایز از یکدیگر قرار گیرند.
اساس تکنیک کلنی کانت
در تکنیک کلنی کانت، از نمونه حاوی باکتری که در محیط مایع قرار دارد سریال دایلوشن (رقت سریالی) تهیه شده و سپس به صورت یک لایه ی نازک توسط سواب، آنس لوپ و یا سر سمپلر به آرامی به روی محیط جامد منتقل می گردد. در حین کشت، محیط به آرامی چرخانده می شود تا مایع به صورت یکنواخت در سراسر محیط کشت جامد پخش گردد. برخی از باکتری های موجود در نمونه ی رقیق شده از یکدیگر جدا شده و منجر به رشد بهتر می شود.
روش انجام تکنیک کلنی کانت
- مرحله اول تهیه رقت سریالی از نمونه است، برای مثال یک نمونه مایع با ضریب رقت ۰.۱ شروع به رقیق شدن می کند ( از لوله ی اول ۱ میلی لیتر به ۹ میلی لیتر مایه در لوله دوم اضافه می شود)
- از هر لوله تهیه شده (رقت سریالی) میزان ۰.۱ میلی لیتر برداشته و به مرکز محیط کشت جامد منتقل می نمائیم
- سواب استریل (پخش کننده) را برداشته و از استریل بودن آن اطمینان حاصل می نمائیم
- در کنار شعله ی آتش، نمونه چکانده شده بر روی محیط جامد را به آرامی در سطح محیط پخش می کنیم و در حین انجام این کار به آرامی محیط کشت را می چرخانیم.
- محیط کشت را در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴ ساعت نگهداری می کنیم.
- پس از گذشت ۲۴ ساعت تعداد کلنی ها در نمونه شمارش می گردد.
- سپس تعداد کلنی در هر پلیت شمارش شده و با ضرب کردن در ضریب رقت تعداد کلنی ها به واحد CFU بدست می آید.
موارد استفاده ی تکنیک کلنی کانت
تکنیک پخش کردن مایع در محیط جامد (کلنی کانت) در کنار رقت های سریالی یک روش ارزشمند و معمول آزمایشگاهی برای بررسی تعداد کلنی میکروبی در یک نمونه آزمایشگاهی است.
از این روش می توان برای بررسی برخی خصوصیات میکروبی مثل رنگ، سایز، برآمدگی و… استفاده نمود.
برای بررسی نمونه از نظر تعداد باکتری های موجود در آن نیز می توان از این تکنیک بهره گرفت.
برای بررسی حساسیت و مقاومت یک باکتری خاص نسبت به یک ماده دارویی و یا آنتی بیوتیک خاص.
برای بدست آوردن رشد کافی از یک باکتری برای انجام تست های بیوشیمیایی، سرولوژیک و مولکولی متفاوت.
برای شمارش تعداد باکتری های زنده در نمونه کشت شده.
برای ایزولاسیون و استوک کردن نمونه های باکتریایی و قارچی.
بری انتقال و یا نگهداری کوتاه مدت از نمونه های باکتریایی و قارچی زنده کشت شده.
ویژگی های تکنیک کلنی کانت
در کلنی کانت به روش spread plating میکروب های حساس به دمای بالا تحت تاثیر قرار نمی گیرند
به دلیل اینکه کشت سطحی در محیط جامد انجام می گیرد، ایزولاسیون ارگانیسم به راحتی انجام می پذیرد
محدودیت های کلنی کانت
رشد باکتری های بی هوازی و میکروائروفیل به خوبی در کلنی کانت به روش Spread plating انجام نمی پذیرد
در صورتی که برای کلنی کانت تعداد باکتری زیادی در محیط کشت رشد نماید شمارش قابل انجام نخواهد بود (تعداد کلنی بین ۳۰-۳۰۰ شمارش میگردد).
شمارش دقیق کلنی ها در این روش کلنی کانت با محدودیت رو به رو است.
انتقال میزان بیشتر از ۰.۱ میلی لیتر از محلول بر روی محیط کشت امکان پذیر نمی باشد، چرا که بیشتر از این میزان مایع به خوبی بر روی محیط پخش نمی گردد.
جهت اطلاع و سهولت شما کاربر گرامی برای استفاده از خدمات مطالعات حیوانی – بافت شناسی – آزمایشگاه بیوتکنولوژی – آزمایشگاه پاتولوژی – آزمایشگاه ژنتیک – اسانس گیری – جنین شناسی – میکروبیولوژی توسط لینک های مربوطه اقدام نمایید.
مطالب مرتبط: بررسی و اندازه گیری بیوفیلم باکتریایی – آلودگی میکروبی در نمونه های مختلف – تست حساسیت آنتی بیوتیک
خدمات مرتبط: خدمات میکروبیولوژی – خدمات پژوهشی در حوزه علم بیوتکنولوژی – تولید پروتئین های نوترکیب
