مولکولی

روش های از بین بردن DNA ژنومی در RNA استخراج شده

نحوه حذف DNA ژنومی در استخراج RNA

آنزیم DNAase

معمولاً RNA استخراج شده به DNA ژنومی آلوده است که در آزمایشات qPCR اختلال ایجاد می‌کند. برای از بین بردن آن روش‌های متعددی وجود دارد. تیمار نمونه‌های RNA استخراج شده با DNase از رایج ترین روش های تخلیص RNA است.

روش های از بین بردن DNA ژنومی در RNA استخراج شده

 

در استفاده از آنزیم DNase برای از بین بردن DNA باید به این نکته توجه شود که خنثی سازی عملکرد آنزیم با EDTA به درستی انجام شود، زیرا حضور منیزیم در دمای بالا قابلیت تخریب RNA را دارد.

 

روش‌های مختلفی علاوه بر DNase برای از بین بردن DNA وجود دارد مانند ستون‌های حذف کننده‌ی DNA، استفاده از لیتیم کلراید ( برای کار با miRNA استفاده از لیتیم کلراید توصیه نمی‌شود)، دانه‌های مغناطیسی (m-beads) و…

علاوه بر این با طراحی پرایمر بصورت اختصاصی ( Exon-exon junction) برای RNA تاثیر آلودگی آن را با DNA می‌توان خنثی کرد.

یکی از راه‌های تشخیص آلودگی RNA استخراج شده به DNA، استفاده از ژل الکترفورز است که به دلیل سنگین بودن آن در قسمت بالایی ژل قرار می‌گیرد و از RNA و cDNA قابل تفکیک است‌.

آلودگی DNA ژنومی در RNA استخراج شده

یکی دیگر از راه‌های تشخیص آلودگی نمونه به DNA، استفاده Real time pcr است که نمونه RNA را در کنار نمونه‌های cDNA برای ژن مورد نظر تکثیر می‌ کنند که تکثیر این محصول نشان از آلودگی نمونه با DNA است.

آلودگی DNA ژنومی در RNA استخراج شده

جهت اطلاع و سهولت شما کاربر گرامی برای استفاده از خدمات مطالعات حیوانی – بافت شناسی – آزمایشگاه بیوتکنولوژی – آزمایشگاه پاتولوژی – آزمایشگاه ژنتیک – اسانس گیری – جنین شناسی – میکروبیولوژی توسط لینک های مربوطه اقدام نمایید.

مطالب مرتبط: بررسی کمی استخراج RNA با اسپکتروفوتومتر در سلول یا بافت سنتز cDNA از RNA استخراج شده از سلول و بافت

خدمات مرتبط: استخراج RNA و DNA سنتز cDNA ، طراحی پرایمر ، انجام تکنیک Real time PCR

نمایش بیشتر

نوشته های مشابه

همچنین ببینید
بستن