در این بخش به نحوه جداسازی سلول‌ها از بافت‌های مختلف، نحوه کشت سلول در فلاسک و پلیت، تعویض محیط، پاساژ دادن سلول‌ها، شمارش سلول و انواع رنگ آمیزی ها مانند تریپان بلو و … می پردازیم، با ما همراه باشید.
کشت سلولی در مطالعات چرخه رشد سلولی، روش های کنترل رشد سلول های سرطانی ،تعدیل بیان ژن ها، تکوین جانوران ،تولید حیوانات تراریخته، تولید واکسن های ویروسی و تولید آنتی بادی و مهندسی بافت کاربرد دارد.
تجهیزات ضروری برای انجام تکنیک کشت سلول
- هود لامینار
- انکوباتور
- کپسولco2
- سانتریفوژ
- اتوکلاو
- پیپیت و میکروپیپت
- لام شمارش سلول ( لام نئوبار یا توما )
- میکروسکوپ نوری معکوس
- تانک ازت و فریزر
- اتاق کار مخصوص کشت سلول
- وسایل مصرفی مورد نیاز برای انجام کار
- محلول‌های مورد نیاز برای کشت
انواع تکنیک های رایج کشت سلولی
به طور کلی کشت سلول می‌تواند نتیجه مهاجرت سلول‌ها از یک قطعه بافت و یا جداسازی مکانیکی یا آنزیمی از یک بافت باشد.
انواع کشت سلول
- کشت ارگان
- کشت اولیه قطعات بافتی
- کشت سلول
کشت ارگان
در این نوع کشت، بافت در سطح تماس مایع-گاز قرار می‌گیرد که در آن ساختار سه بعدی بافت حفظ خواهد شد.
کشت اولیه قطعات بافتی
در این روش بخشی از بافت در سطح جامد قرار می‌گیرد و با محیط مایع در تماس است که در آن به منظور رشد، سلول‌ها مهاجرت می‌کنند.
کشت سلول
در این روش پس از لیز بافت به روش مکانیکی یا آنزیمی، سلول‌های حاصل به صورت یک لایه چسبنده روی یک سوبسترا یا سوسپانسیون سلولی کشت داده می‌شود
سرنوشت کشت‌های اولیه
- دودمان‌های سلولی پیوسته : سلول هایی هستند که در صورت وجود مواد غذایی در محیط، تکثیر خود را ادامه می‌دهد و برای تعداد نامحدود قابل پاساژ است.
- دودمان‌های سلولی با عمر محدود : این سلول‌ها فقط می‌تواند برای تعداد محدودی تکثیر شود و پس از تکثر رشد آن متوقف می‌شود.
تخلیص دودمان سلولی
برای مطالعات مختلف به جمعیت مشابهی از یک سلول نیاز است، با توجه به اینکه در کشت‌های اولیه جمعیت متنوعی از سلول‌ها وجود دارد برای جداسازی رده‌ی سلولی مورد نظر به خالص سازی نیاز است، متداول‌ترین روش تخلیص در کشت پیوسته کلونینگ سلولی است. علاوه بر این می‌توان برای خالص سازی از محیط‌های کشت انتخابی و دستگاه های تشخیص مارکرهای سطحی FACS و MACS استفاده کرد.
کلونینگ سلولی
در این روش یک جمعیت سلولی، از تقسیم میتوزی یک سلول به وجود می‌آید که یک کلون هموژن را ایجاد می‌کند. روش‌های متنوعی برای انجام کلونینگ وجود دارد. با ما در ادامه مطالب کشت سلول همراه باشید.
مطالب مرتبط: تاثیر عوامل محیط بر سلول‌های کشت شده – مراحل چرخه سلولی و تفکیک سلول ها – تمایز پیری سلولی و اجزای محیط کشت
خدمات مرتبط: خدمات سلولی – محیط های کشت تمایزی – داربست های مهندسی بافت
