بررسی بیان پروتئین با روش وسترن بلات
وسترن بلات تکنیکی است که برای شناسایی یک پروتئین، از مخلوط پیچیده‌ای از پروتئین‌های استخراج شده از سلول‌ها و بافت‌ها، مورد استفاده قرار می‌گیرد.
وسترن بلات بطور کلی شامل سه مرحله است :
- جداسازی براساس اندازه پروتئین‌ها توسط ژل SDS-PAGE
- انتقال به غشای کاغذی
- نشاندار کردن پروتئین‌های هدف با استفاده از آنتی‌بادی های اولیه و ثانویه
لیز کردن بافت یا سلول
◀ یکی از اقدامات مهم برای انجام وسترن بلات تهیه نمونه‌های لیز شده از سلول یا بافت است. در حین انجام لیز سلول و بافت باید به این نکته توجه شود که کل مراحل روی یخ انجام گیرد و حتی بافرهای مورد استفاده برای لیز کردن در دمای ۴ درجه سانتیگراد باشند.
◀ برای لیز کردن سلول یا بافت می‌توان از مخلوط بافر RIPA به همراه مهارکننده‌ی پروتئاز (protease inhibitor) به صورت تازه (fresh) استفاده کرد و آن را به مدت یک ساعت روی یخ یا دمای ۴ درجه انکوبه نمود.
◀ بعد از سانتریفوژ می‌توان سوپرناتانت را در دمای ۲۰- تا ۸۰- برای مدت طولانی نگهداری کرد.
مطالب مرتبط: مواد و تجهیزات در تکنیک وسترن بلات – الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید در وسترن بلات
خدمات مرتبط: آزمایش های وسترن بلات، الایزا و فلوسیتومتری – استخراج RNA و DNA سنتز cDNA ، طراحی پرایمر ، انجام تکنیک Real time PCR
