الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید در وسترن بلات
از الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید به دلیل وجود منافذ یک اندازه و یک شکل، برای جداسازی پروتئین ها در اندازه های ۵ تا ۲۰۰ کیلو دالتون استفاده می شود. اندازه منافذ با غلظت آکریل آمید و پودر بیس آکریل آمید مورد استفاده در ژل، کنترل می شود. درصد ژل انتخاب شده به پروتئین مورد نظر برای شناسایی بستگی دارد.
بطور کلی رابطه بین پروتئین و درصد ژل به صورت زیر می باشد :
- اگر اندازه ی پروتئین کمتر از ۱۰ کیلودالتون باشد، از ژل ۱۵ % استفاده می شود.
- اگر اندازه ی پروتئین بین ۱۰ تا ۳۰ کیلودالتون باشد، از ژل ۱۲% استفاده می شود.
- اگر اندازه ی پروتئین بین ۳۰ تا ۱۰۰ کیلودالتون باشد، از ژل ۱۰% استفاده می شود.
- اگر اندازه ی پروتئین بین ۱۰۰ تا ۲۰۰ کیلودالتون باشد، از ژل ۸% استفاده می شود.
ژل پلی آکریل آمید از دو طبقه تشکیل شده است. قسمت پایینی separating gel و قسمت بالایی stackimg gel می باشد. stacking gel محل قرارگیری چاهک ها بوده و نمونه ها و ladder در آن ریخته می شود. غلظت این ژل به طور معمول ۴ % است و بعد از انتقال پروتئین ها در دستگاه الکتروفورز از ژل پایین جدا می شود. separating gel محل run شدن پروتئین ها می باشد.
مطالب مرتبط: تفسیر باندهای غیر معمول وسترن بلات – روش‌های مختلف تفسیر باندهای ناقص وسترن بلات
خدمات مرتبط: آزمایش های وسترن بلات، الایزا و فلوسیتومتری – استخراج RNA و DNA سنتز cDNA ، طراحی پرایمر ، انجام تکنیک Real time PCR
