تولید آنتی بادی های پلی کلونال

آنتی بادی های پلی کلونال

آنتی بادی های پلی کلونال توسط رده های مختلف لنفوسیت های B ترشح می شوند. این آنتی بادی ها در واقع مجموعه ای از ایمونوگلوبولین ها هستند که در برابر یک آنتی ژن اختصاصی واکنش نشان می دهند و اپیتوپ های متفاوتی را روی یک آنتی ژن شناسایی می کنند.
برای تولید آنتی بادی های پلی کلونال به حیوانات آزمایشگاهی آنتی ژن یا مخلوطی از آنتی ژن/ادجوانت تزریق می شود، و لازم است خون حیوان آزمایشگاهی برای نظارت بر پاسخ به آنتی بادی در طول آزمایش و در انتها برای به دست آوردن آنتی بادی ها جمع آوری شود.

برای اطلاع از لیست آنتی بادی های موجود و دریافت مشاوره رایگان در مورد مسیر های سیگنالینگ انواع آنتی بادی ها اینجا کلیک کنید

مراحل تولید آنتی بادی پلی کلونال

مراحل تولید آنتی بادی پلی کلونال شامل موارد زیر است

• آماده سازی آنتی ژن
• انتخاب گونه های جانوری
• انتخاب و آماده سازی ادجوانت
• انجام پروتکل تزریق
• نظارت بر پاسخ به آنتی بادی
• جمع آوری آنتی بادی

آماده سازی آنتی ژن برای تولید آنتی بادی

هنگام تولید آنتی بادی ها، مهم است که ویژگی های آنتی ژن را در نظر بگیریم که شامل کیفیت و کمیت آنتی ژن و آماده سازی آنتی ژن می شود.
پاسخ ایمنی به دست آمده به خلوص آنتی ژن اعمال شده بستگی دارد. ناخالصی‌های جزئی (کمتر از ۱%) منجر به تولید آنتی‌بادی‌هایی می شوند که فعالیت بیشتری در برابر ناخالصی نسبت به آنتی ژن مورد نظر دارند. (مثلاً با بسیاری از آنتی‌ژن‌های باکتریایی)
خالص سازی آنتی ژن زمان بر و پر زحمت است اما بسیار ارزشمند است. خالص سازی منجر به افزایش تعداد آنتی بادی های اختصاصی و حذف مراحل پیچیده و زمان بر حذف بسیاری از آنتی بادی های ناخواسته می شود.

انتخاب گونه های جانوری

هنگام انتخاب گونه حیوانی برای تولید آنتی بادی پلی کلونال، توجه به موارد زیر ضروری است

• مقدار آنتی بادی پلی کلونال مورد نیاز
• سهولت در گرفتن نمونه خون از حیوان آزمایشگاهی
• رابطه فیلوژنتیکی بین آنتی ژن و گونه های حیوانی
• استفاده مورد نظر از آنتی بادی پلی کلونال

بیشترین گونه های حیوانی که برای تولید آنتی بادی پلی کلونال در محیط آزمایشگاهی استفاده می شوند شامل خرگوش، موش آزمایشگاهی، موش صحرایی (رت)، همستر، خوکچه هندی، بز، گوسفند و مرغ می شود.

برای تولید آنتی بادی پلی کلونال، خرگوش ها اغلب به دلیل اندازه مناسب، سهولت حمل و خونگیری، عمر نسبتاً طولانی، تولید کافی آنتی سرم با تیتر بالا و میل ترکیبی بالا استفاده می شوند.

مطلب پیشنهادی: انواع گونه های آزمایشگاهی – انواع سویه های موش آزمایشگاهی

انتخاب و آماده سازی ادجوانت

زمانی که قرار است بر علیه آنتی ژنی، آنتی بادی تولید شود که ایمنی زایی ضعیفی دارد، سیستم ایمنی نیاز به یک محرک برای القای یک پاسخ ایمنی موثر دارد. برای این منظور می‌توان از ادجوانت‌ها استفاده کرد که می‌توانند پاسخ ایمنی را در برابر یک پاسخ سلولی یا هومورال هدایت کند.

انجام پروتکل تزریق جهت تولید آنتی بادی های و پلی کلونال

فرآیند تزریق با توجه به گونه های حیوانی و ادجوانت می تواند کمی متفاوت باشد.

انتخاب راه تزریق تا حدودی به انتخاب گونه حیوانی و ادجوانت و همچنین ویژگی، کمیت و حجم آنتی ژن بستگی دارد. روش های رایج تزریق برای تولید آنتی بادی پلی کلونال عبارتند از

تزریق زیر جلدی (S.C)
تزریق داخل جلدی (I.D)
تزریق عضلانی (I.M)
تزریق داخل صفاقی (I.P)
تزریق داخل وریدی (I.V)

مطلب پیشنهادی: انواع تزریقات در موش و رت و سایر حیوانات آزمایشگاهی

نظارت بر پاسخ به آنتی بادی

در پستانداران، پاسخ آنتی بادی در طول آزمایش را می توان با ارزیابی نمونه خون برای آنتی بادی در سرم کنترل نمود. در مرغ ها، به دلیل دفع آنتی‌بادی‌ها در تخم‌ مرغ، می‌توان تیتر آنتی بادی ها را در تخم مرغ بررسی کرد.
دفعات جمع آوری خون و حداکثر حجم خونی که می توان به طور ایمن از حیوان دریافت کرد محدود است. اگر خون بیش از حد، مکررا و یا خیلی سریع و بدون جایگزینی گرفته شود، ممکن است حیوان دچار شوک هیپوولمیک کوتاه مدت و کم خونی شود.

جمع آوری آنتی بادی

عمل تخلیه خون حیوان باید با بیهوشی عمومی انجام شود و بهتر است با سوراخ کردن قلب انجام شود تا منجر به مرگ سریع حیوان شود.
در مورد جوندگان کوچک مانند موش آزمایشگاهی و رت برای اطمینان از مرگ، بهتر است با جابجایی مهره گردن حیوان کشته شود. در مورد سایر حیوانات می توان با افزایش دوز ماده بیهوشی از مرگ حیوان اطمینان حاصل کرد.

برای اطلاع از لیست آنتی بادی های موجود و دریافت مشاوره رایگان در مورد مسیر های سیگنالینگ انواع آنتی بادی ها اینجا کلیک کنید

مطلب پیشنهادی: خونگیری از موش رت و سایر حیوانات آزمایشگاهی

مطالب مرتبط: آنتی بادی ها در تست های آزمایشگاهی – تکنیک الایزا – تکنیک وسترن بلات
خدمات مرتبط: انجام تکنیک وسترن بلات و الایزا با بانکی غنی از انواع آنتی بادی – انجام خدمات ایمونوهیستوشیمی و ایمونوسیتوشیمی با بانکی غنی از انواع آنتی بادی