مطالب علمیمطالب علمیمیکروبیولوژی

روش E-test , Agar well diffusion

 

روش E-test

این روش در واقع نوعی آنتی­ بیوگرام به روش دیسک دیفیوژن است که توانایی تعیین MIC را دارد. در این روش، غلظت­های مختلفی از آنتی ­بیوتیک در روی نوارهای پلاستیکی بسیار ظریف قرار داده شده است. این نوارها در روی سطح محیط کشت مولرهینتون آگار تلقیح شده با باکتری مورد آزمایش (­غلظتی برابر کدورت نیم مک فارلند) قرار داده می­شوند و بعد از ۱۸ ساعت  انکوباسیون، نتیجه تست از جهت بالای نوار به طرف پایین نوار (­از غلظت زیاد آنتی بیوتیک به سمت غلظت کم) خوانده می­شود. نفوذ آنتی­بیوتیک از نوار به محیط آگاردار اطراف آن باعث ایجاد یک هاله عدم رشد تخم مرغی یا بیضی شکل در اطراف هر نوار می­نماید. مقدار MIC آنتی بیوتیک جایی است که هاله بیضی شکل نوار پلاستیکی را قطع می­کند.

الف)روش انجام کار و گزارش کردن

بعد از ایزوله کردن باکتری ، سوسپانسیونی معادل کدورت نیم مک فارلند تهیه میگردد. سواب استریل به لوله آغشته کرده و به جداره­ های داخلی لوله کاملا تماس داده تا اضافی سوسپانسیون گرفته شود و سپس بر روی محیط مولرهینتون آگار در تمام جهات کشت داده تا در سطح پلیت کاملا تلقیح گردند.

پلیت ­ها را به مدت ۱۰-۵ دقیقه در دمای اتاق گذاشته تا رطوبت آنها جذب شود، سپس نوارهای E-test را با کمک پنس استریل در کنار شعله و زیر هود میکروبیولوژی روی سطح پلیت گذاشته و سپس در انکوباتور ۳۵ درجه سانتی­گراد بمدت  ۱۸ ساعت قرار می گیرند. در نهایت نتیجه تست با توجه به دستورالعمل شرکت تولید کننده و معیارهای CLSI­ قرائت میگردد.

روش انتشار در حفره آگار ( Agar well diffusion)

 

این روش به طور گسترده ای به منظور بررسی فعالیت ضد میکروبی گیاهان یا عصاره استفاده می شود.در این روش همانند روش disk diffusion  سوسپانسیون میکروبی را در سطح پلیت آگار طوری پخش می نماییم که به طور یکنواخت تمام سطح پلیت را بپوشاند.سپس یک سوراخ با قطر ۶ تا ۸ میلی متر در شرایط استریل بر روی آگار ایجاد میکنیم و مقداری از عامل ضد میکروبی یا عصاره گیاهی تهیه شده (حجم ۱۰۰ تا ۲۰۰ میلی لیتر) با غلظت معین داخل حفره آگار وارد می کنیم. سپس پلیت آگار را تحت شرایط مناسب انکوبه می کنیم. عامل ضد میکروبی در محیط آگار پخش شده و مانع از رشد سویه میکروبی مورد آزمایش می شود.

نمایش بیشتر

نوشته های مشابه

پاسخی بگذارید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

شش + 5 =

دکمه بازگشت به بالا
بستن